赵丹慧 张海文 薛延 张辉
骨Ｉ型胶原的降解产物是骨吸收的特异性指标。我们首次在国内使用一种新的单克隆抗体,采用酶联免疫吸附测定(ＥＬＩＳＡ)方法,测定尿中骨Ｉ型胶原降解产物Ｃ末端肽(ｃｒｏｓｓｌａｐｓ)的含量及与肌酐(ｃｒ)的比值,并同时测定尿羟脯氨酸(Ｈｏｐ)值与ｃｒｏｓｓｌａｐｓ比较,并进行临床应用的评价。
一、对象
1.正常样品的选择:0～30岁受试者体格检查均正常,肝、肾功能正常,无明显的内分泌疾病和钙、磷代谢紊乱。表1列出正常人的性别和年龄分组。
2.临床观察:
(1)使用泼尼松治疗肾病患儿20例,其他自身免疫性疾病10例。分别于激素治疗前及治疗6个月时测定尿生化指标。
(2)2岁以下佝偻病34例诊断依据为1986年卫生部“小儿四病”防治方案诊断标准(男、女各15例)。
(3)成骨肉瘤8例(男5,女3),平均年龄为18±5岁。取空腹第2次晨尿,置于-20℃冰箱内保存。
二、方法
1.Ｃｒｏｓｓｌａｐｓ测定:采用ＥＬＩＳＡ,丹麦ＯｓｔｅｏｍｅｔｅｒＡ/ＳＣｏｐｅｎｈａｇｅｎ公司试剂盒。批内和批间变异系数(ＣＶ)分别为8.44%和10.60%。经肌酐(Ｃｒ)校准后的单位以ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ(μｇ/ｍｍｏｌ)表示。
2.尿羟脯氨酸(Ｈｏｐ)测定:采用Ｇｏｒｄｅｌａｄｚｅ法,批内和批间ＣＶ为4.5%和8.3%,以Ｈｏｐ/Ｃｒ(ｍｇ/ｇ)表示。
3.尿Ｃｒ测定:用苦味酸法,批内和批间ＣＶ为1.48%和13.2%。其值用于校正上述两种尿指标。
三、统计学处理
激素治疗患儿采用同体比较ｔ检验。其他结果采用Ｓｔｕｄｅｎｔｔ检验。数据均以ｘ±ｓｘ表示。
四、结果
1.正常人尿ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ和Ｈｏｐ/Ｃｒ比值与年龄、性别间的关系。由表2看出0～14岁正常人尿ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ比值在2岁内最高,以后逐渐下降,与年龄的增长呈负相关(ｒ=-0.45,Ｐ<0.001)。
两种指标的性别变化也是一致的:从趋势上看除2～3岁组女性高于男性外,其余各组男性高于女性,但总体男女两组差异无显著意义(Ｐ>0.05)。
2.临床不同疾病患者尿中ｃｒｏｓｓ ｌａｐｓ/Ｃｒ与Ｈｏｐ/Ｃｒ的比值由表3看出,肾病及其他免疫性疾病患儿使用泼尼松治疗前后ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ差异有显著意义(Ｐ<0.05);且治疗前比值明显低于对照组(Ｐ<0.05);Ｈｏｐ/Ｃｒ治疗前后差异无显著意义(Ｐ>0.05)。34例佝偻病患儿的ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ比值明显低于同龄正常值(Ｐ<0.001);而Ｈｏｐ/Ｃｒ比值则高于同龄正常儿童(Ｐ<0.001)。成骨肉瘤患者ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ比值高于正常同龄组(Ｐ<0.01)。讨论:ＥＬＩＳＡ法测定尿中Ｉ型胶原是评价骨吸收和骨丢失率的最新生化指标。文献〔1,2〕报道ｃｒｏｓｓｌａｐｓ与另一个骨吸收敏感指标ＰＹＤ高度相关。本研究证明应用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ法,直接测定尿中Ｉ型胶原Ｃ末端肽ｃｒｏｓｓｌａｐｓ的含量,方法简便、灵敏,特异性强,重复性好,是一种理想的测定骨吸收值的临床新手段。
本文结果表明尿ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ比值随年龄的增长而下降,呈明显负相关。2岁以内尿中含量最高;此后均有不同程度下降。15～20岁与20～30岁两个年龄组的含量基本相等。由此说明14岁以前骨吸收及骨转换的速度最快;青春后期至成年期骨转换率下降,尿中ｃｒｏｓｓ ｌａｐｓ趋平稳状态。0～14岁Ｈｏｐ/Ｃｒ变化规律与ｃｒｏｓｓｌａｐｓ基本一致。本研究结果提示14岁以前是骨形成与吸收重要时期,由于骨转换的速度较快,补充足量的钙剂对于促进骨的生长发育、形成良好骨量基础至关重要。我们还发现虽然ｃｒｏｓｓｌａｐｓ与Ｈｏｐ在趋势上有男性高于女性的特点,但经统计学处理无显著意义。本文结果表明30例泼尼松治疗患儿在6个月时尿ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ比治疗前明显升高,说明在监测继发性骨丢失过程中ｃｒｏｓｓｌａｐｓ/Ｃｒ的敏感性高于Ｈｏｐ/Ｃｒ,同时也证明泼尼松有促进骨吸收的作用。34例佝偻病患儿尿中的ｃｒｏｓｓ ｌａｐｓ/Ｃｒ低于同龄健康儿童而Ｈｏｐ/Ｃｒ高于对照组。佝偻病的发病机制为软骨基质钙化不良,而软骨基质含ＩＩ型胶原。本文中ｃｒｏｓｓｌｏｐｓ/Ｃｒ下降而Ｈｏｐ/Ｃｒ升高的现象提示:佝偻病时骨吸收速度有可能下降,Ｉ型胶原丢失减少,而尿中Ｈｏｐ/Ｃｒ增加可能主要来源于软骨ＩＩ型胶原的降解。成骨肉瘤ｃｒｏｓｓｌａｐｓ明显高于对照组,说明骨肿瘤患者的骨吸收处于亢进状态。 |
